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KIT ELISA - ISTRUZIONI PER L'USO

NOTE TECNICHE

- Permettere ai campioni ed ai reagenti di raggiungere la temperatura ambiente prima di eseguire il test. Non scongelare i campioni o i reagenti a bagnomaria.
- Agitare delicatamente i campioni ed i reagenti prima dell'uso.
- Evitare che si formi schiuma. Evitare l'esposizione dei reagenti a eccessive fonti di calore o di luce durante la conservazione e le incubazioni.
- Campioni e standard dovrebbero essere analizzati in duplicato.
- Eseguire un curva standard per ciascun test.
- Usare solo strip pre-adsorbite e provenienti dallo stesso lotto per ciascun test. Non mescolare reagenti provenienti da kit appartenenti a lotti diversi.
- Eseguire le incubazioni in una scatola chiusa e contenente carta umida allo scopo di prevenire l'eccessiva evaporazione.

PREPARAZIONE DEI REAGENTI

- Ricostituire il calibratore XG00n-C(1-6) liofilizzato con 440 µL di acqua deionizzata per ogni calibratore.
- Diluire 5 volte il tampone di diluizione XG-DB5 con acqua deionizzata.
- Preparare la quantit&agreave; richiesta del tampone di lavaggio XG-WB3 diluendo 10 volte la soluzione concentrata con acqua deionizzata.

ESECUZIONE DEL TEST

1. Preparare i reagenti come descritto precedentemente.
2. Allestire la piastra con un numero sufficiente di pozzetti che comprendano gli standard ed i campioni da analizzare.
3. Rimuovere le strip in eccesso e conservarle nell'apposita busta di conservazione con l'essiccante.
4. Lavare 3 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well) (mostrato nel videoclip).
5. Dispensare 100 µL/well dei calibratori ricostituiti C1, C2, C3, C4, C5 e C6 (in duplicato) ottenendo una curva di calibrazione a sei punti. La concentrazione esatta dei calibratori è riportata sull'etichetta.
6. Dispensare 100 µL/well dei campioni opportunamente diluiti in duplicato. Consultare il datasheet per la diluizione da utilizzare. Usare il tampone di diluizione XG-DB5 come diluente.
7. Incubare 1h a temperatura ambiente.
8. Lavare 6 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well).
9. Aggiungere 100 µL/well della soluzione di anticorpo secondario XG-EA alla diluizione appropriata.
10. Incubare 1h a temperatura ambiente.
11. Lavare 6 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well).
12. Aggiungere 100 µL/well di soluzione cromogena XG-CH3. Lasciare incubare al buio per 10-15 min, quindi, aggiungere 100 µL/well di soluzione di arresto XG-ST3 e misurare i valori di densità ottica di ciascun pozzetto utilizzando il lettore di micropiastre equipaggiato con un filtro a 450 nm. Leggere la colorazione della reazione bloccata entro 1 ora.
13. Elaborate i valori di densità ottica con il sofware "Xerepro"

CURVA DI CALIBRAZIONE SIMULATA

ATTENZIONE!
La seguente procedura può essere effettuata solo utilizzando la medesima piastra ELISA.
INFORMAZIONI
Per l'utilizzo del test ELISA fare riferimento alle istruzioni d'uso presenti nella scatola del kit.
L'elaborazione dei dati deve essere eseguita con Xerepro versione 2.3 o successiva.

Giorno 1 - preparazione del punto di riferimento
1. Ricostituire il calibratore 1 (XG00x-C1) con 440µL di acqua deionizzata.
2. Preparare il riferimento come segue: 220µL di XG00x-C1 + 700µL di H2O + 180µL di XG-DB5 NON ricostituito.
3. Eseguire 5 aliquote da 220µL del riferimento appena preparato.
4. Congelare tutte e 5 le aliquote a -20°C.
5. Conservare il calibratore ricostituito (XG00x-C1) e il diluente (XG-DB5) a 2-8°C.

Giorno 2 - da eseguire entro 48 ore dal giorno 1
1. Dispensare, in duplicato, 100µL/well del riferimento preparato e congelato il giorno 1.
2. Eseguire il test ELISA come riportato nelle istruzioni d'uso.
3. Elaborare le OD con Xerepro avendo cura di lasciare le celle relative al punto di riferimento vuote.

Giorno 3 - da eseguire entro la scadenza del kit
1. Dispensare, in duplicato, 100µL/well del riferimento preparato e congelato il giorno 1.
2. Eseguire il test ELISA come riportato nelle istruzioni d'uso senza inserire i punti di calibrazione.
3. Elaborare le OD con Xerepro inserendo le OD della curva e del riferimento (Robs) ottenuti il giorno 2, e le OD del riferimento (Rsim) e dei campioni appena ottenuti.