- | Permettere ai campioni ed ai reagenti di raggiungere la temperatura ambiente prima di eseguire il test. Non scongelare i campioni o i reagenti a bagnomaria. |
- | Agitare delicatamente i campioni ed i reagenti prima dell'uso. |
- | Evitare che si formi schiuma. Evitare l'esposizione dei reagenti a eccessive fonti di calore o di luce durante la conservazione e le incubazioni. |
- | Campioni e standard dovrebbero essere analizzati in duplicato. |
- | Eseguire un curva standard per ciascun test. |
- | Usare solo strip pre-adsorbite e provenienti dallo stesso lotto per ciascun test. Non mescolare reagenti provenienti da kit appartenenti a lotti diversi. |
- | Eseguire le incubazioni in una scatola chiusa e contenente carta umida allo scopo di prevenire l'eccessiva evaporazione. |
- | Ricostituire il calibratore XG00n-C(1-6) liofilizzato con 440 µL di acqua deionizzata per ogni calibratore. |
- | Diluire 5 volte il tampone di diluizione XG-DB5 con acqua deionizzata. |
- | Preparare la quantit&agreave; richiesta del tampone di lavaggio XG-WB3 diluendo 10 volte la soluzione concentrata con acqua deionizzata. |
1. | Preparare i reagenti come descritto precedentemente. |
2. | Allestire la piastra con un numero sufficiente di pozzetti che comprendano gli standard ed i campioni da analizzare. |
3. | Rimuovere le strip in eccesso e conservarle nell'apposita busta di conservazione con l'essiccante. |
4. | Lavare 3 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well) (mostrato nel videoclip). |
5. | Dispensare 100 µL/well dei calibratori ricostituiti C1, C2, C3, C4, C5 e C6 (in duplicato) ottenendo una curva di calibrazione a sei punti. La concentrazione esatta dei calibratori è riportata sull'etichetta. |
6. | Dispensare 100 µL/well dei campioni opportunamente diluiti in duplicato. Consultare il datasheet per la diluizione da utilizzare. Usare il tampone di diluizione XG-DB5 come diluente. |
7. | Incubare 1h a temperatura ambiente. |
8. | Lavare 6 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well). |
9. | Aggiungere 100 µL/well della soluzione di anticorpo secondario XG-EA alla diluizione appropriata. |
10. | Incubare 1h a temperatura ambiente. |
11. | Lavare 6 volte con il tampone di lavaggio XG-WB3 (300 µL/well). |
12. | Aggiungere 100 µL/well di soluzione cromogena XG-CH3. Lasciare incubare al buio per 10-15 min, quindi, aggiungere 100 µL/well di soluzione di arresto XG-ST3 e misurare i valori di densità ottica di ciascun pozzetto utilizzando il lettore di micropiastre equipaggiato con un filtro a 450 nm. Leggere la colorazione della reazione bloccata entro 1 ora. |
13. | Elaborate i valori di densità ottica con il sofware "Xerepro" |
ATTENZIONE! La seguente procedura può essere effettuata solo utilizzando la medesima piastra ELISA. |
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INFORMAZIONI Per l'utilizzo del test ELISA fare riferimento alle istruzioni d'uso presenti nella scatola del kit. L'elaborazione dei dati deve essere eseguita con Xerepro versione 2.3 o successiva. |
Giorno 1 - preparazione del punto di riferimento | |
1. | Ricostituire il calibratore 1 (XG00x-C1) con 440µL di acqua deionizzata. |
2. | Preparare il riferimento come segue: 220µL di XG00x-C1 + 700µL di H2O + 180µL di XG-DB5 NON ricostituito. |
3. | Eseguire 5 aliquote da 220µL del riferimento appena preparato. |
4. | Congelare tutte e 5 le aliquote a -20°C. |
5. | Conservare il calibratore ricostituito (XG00x-C1) e il diluente (XG-DB5) a 2-8°C. |
Giorno 2 - da eseguire entro 48 ore dal giorno 1 | |
1. | Dispensare, in duplicato, 100µL/well del riferimento preparato e congelato il giorno 1. |
2. | Eseguire il test ELISA come riportato nelle istruzioni d'uso. |
3. | Elaborare le OD con Xerepro avendo cura di lasciare le celle relative al punto di riferimento vuote. |
Giorno 3 - da eseguire entro la scadenza del kit | |
1. | Dispensare, in duplicato, 100µL/well del riferimento preparato e congelato il giorno 1. |
2. | Eseguire il test ELISA come riportato nelle istruzioni d'uso senza inserire i punti di calibrazione. |
3. | Elaborare le OD con Xerepro inserendo le OD della curva e del riferimento (Robs) ottenuti il giorno 2, e le OD del riferimento (Rsim) e dei campioni appena ottenuti. |